WWW.MASH.DOBROTA.BIZ
БЕСПЛАТНАЯ  ИНТЕРНЕТ  БИБЛИОТЕКА - онлайн публикации
 

«ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР СРЕДА ГЛЮКОЗО-ЦИТРАТНО-ЖЕЛТОЧНАЯ ДЛЯ ХРАНЕНИЯ СПЕРМЫ БЫКОВ ПРИ ТЕМПЕРАТУРЕ 2 - 5 ° С ГО СТ 1 4 7 4 6 — 69 Издание официальное Цена 4 ...»

/У Р У б -'М

f

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

СОЮЗА ССР

СРЕДА

ГЛЮКОЗО-ЦИТРАТНО-ЖЕЛТОЧНАЯ

ДЛЯ ХРАНЕНИЯ СПЕРМЫ БЫКОВ

ПРИ ТЕМПЕРАТУРЕ 2 - 5 ° С

ГО СТ 1 4 7 4 6 — 69

Издание официальное

Цена 4

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СТАНДАРТОВ,

СОВЕТА МИНИСТРОВ СССР

пожарный сертификат УДК 6157 :619(06)74) Группа N 1

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ - СТАНДАРТ СОЮЗА ССР

СРЕДА ГЛЮКОЗО-ЦИТРАТНО-ЖЕЛТОЧНАЯ

ДЛЯ ХРАНЕНИЯ СПЕРМЫ БЫКОВ

ГОСТ ПРИ ТЕМПЕРАТУРЕ 2—5 С 1 4 7 4 6 -6 9 Medium, glucose-citratc-yolk. for keeping of bull sperm at temperature 2—SC Постановлением Комитета стандартов, мер и измерительных приборов при Со­ вете Министров СССР от 17/YI 1969 г. № 692 ером введения установлен с 11 1970 г .

Несоблюдение стандарта преследуется по закону Настоящий стандарт распространяется на синтетическую глюкозо-цитратно-желточмую (ГЦЖ ) среду, предназначенную для хранении спермы быков-произэодителей при температуре 2—5°С, применяемой на станциях и пунктах искусственного осеменения .

1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ

1.1. Глюкозо-цитратно-жедточную среду готовят непосредствен­ но перед ее применением па станциях искусственного осеменения в соответствии с Инструкцией по искусственному осеменению круп­ ного рогатого скота, утвержденной Министерством сельского хо­ зяйства СССР, и Ветеринарно-санитарными правилами работы станции с пунктов искусственного осеменения, утвержденными Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяй­ ства СССР .



1.2. В состав ГЦЖ среды зходят компоненты, указанные в табл. 1 .

Таблица 1 Навмеповавих хомпзяситов Ноомм

1. Глюкоза по ГОСТ 6038— нлв медицинская в г 51 зд

2. Натрий лимоннокислый трехзамещеиный пятиводный по 1.4 ГОСТ 5.1314-72 в г Издание официальное Перепечатка воспрещен»

Переиздание. Август 1973 г .

©Издательство стандартов, 1974 .

Стр. 2 ГО СТ 1 4 7 4 & - *

–  –  –

*1.3. Глюкоза медицинская ч. д. а. или х. ч., антибиотики и бе­ лый растворимый стрептоцид должны отвечать требованиям Госу­ дарственной фармакопеи. Все препараты перед применением про­ веряют на безвредность для спермиев животных. Безвредность антибиотиков определяют по ВТУ 117—67, утвержденным Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР, а глюкозы и цитрата — по эталонам этих препаратов, уста­ новленных Государственным научно-контрольным институтом ве­ теринарных препаратов .

1.4. Содержание влаги в глюкозе допускается не более 10% .

При приготовлении среды препарат берут в большем количест­ ве. чем указано в рецепте, с учетом содержания кристаллизацион­ ной воды .

Количество глюкозы (Я) в г вычисляют по формуле:

–  –  –

1.6. Среду готовят в день разбавления спермы. Компоненты, входящие в состав среды, отзешнвают на аналитических весах .

Перед отвешиванием реактивов проверяют точность весов н используют для нашескн часовое стекло, обработанное тампоном, смоченным 96%-ным этиловым спиртом по 'ГОСТ 5962—67 .

1.7. Для приготовления среды используют стерильные колбы и мерные цилиндры по ГОСТ 1770—64 .



Дистиллированную воду кипятят 15—20 мин и берут ее в необ­ ходимом объеме .

Глюкозу и цитрат, стерилизуют ультрафиолетовыми лучами в бактерицидной камере (УНБК-1) в течение 16—20 ван или в рас­ н творе текучим паром при 100°С в течение 30 мин .

После охлаждения раствора до 80— 90°С в стерильных усло­ виях добавляют в него стрептоцид. Затем при температуре 58—60°С в раствор добавляют желток куриных яиц. Для этого скорлупу яиц обеззараживают тампоном, смоченным 70%-ным раствором этилового спирта, или ультрафиолетовыми лучами в настольной бактерицидной камере в течение 10—-16 мин .

Яйцо раскалывают стерильным скальпелем, белок сливают в чашку, а желток осторожно перекладывают на стерильный лист фильтровальной бумаги, чтобы удалить остатки белка и оболочку желтка. Желтки перекатывают к краю фильтровальной бумаги, прокалывают оболочку и сливают их в стерильный цилиндр или аенэурку .

Измеренное количество желтка вносят в колбу с раствором и тщательно встряхивают до получения однородного цвета .

Затем при температуре не выше 45°С вносят антибиотики в сухом виде или предварительно растворенными в 1—2 мл дистил­ лированной воды .

•1.8. Приготовленная ГЦ Ж среда по физико-химическим и био­ логическим свойствам должна отвечать требованиям и нормам, указанным в табл. 2 .

Таблиц* 2

–  –  –

13. Оплодотворяскость здоровых коров в 60 одну охоту при осеменении их разбавлен­ ной спермой со срохом хранения не более 3 суток в %, не менее

2. МЕТОДЫ ИСПЫТАНИИ

2.1. Для контрольной проверки качества ГЦЖ среды, а также соответствия ее требованиям настоящего стандарта должны при­ меняться правила отбора проб и методы испытаний, указанные ниже .

2.2. Контрольная проверка ГЦЖ среды производится государ­ ственным контролером на предприятии-изготовнтеле (станция ис­ кусственного осеменения) или Государственным научно-контроль­ ным институтом ветеринарных препаратов Министерства сельского хозяйства СССР .

2.3. Для контрольной проверки отбирают готовую среду (100 мл).или препараты тех партий (серий), из которых приго­ товлена среда (глюкоза — )100 г; натрий лимоннокислый трехзамещенный пятиводный— flOO г; яйца куриные — б шт.; антибиотики — по 5 флаконов) .

2.4. Внешний вид, цвет и отсутствие механических примесей устанавливают путем осмотра колбы со средой в проходящем све­ те при периодическом встряхивании .

2.5. Стерильность проверяют путем высева среды по 1 мл на мясопептонный бульон (М П Б), 2%-ный мясопептонный агар МПА с 1% глюкозы и на мясопептонный печеночный бульон под вазе­ линовым маслом (среда Китт—Тароцци) .

Наблюдают за посевами в течение 10 суток в соответствии с методикой ветеринарко-санитарной оценки спермы и сред, утверж­ денной Главным управлением ветеринарии МСХ СССР .

2.6. Температуру среды 28— Ж С поддерживают в бактерицид­ ной камере (УНКБ-1) или в термостате .





2.7. Концентрацию водородных донов определяют с помощью потенциометра ЛПУ-01 или другими приборами того же класса точности .

Правильность показаний pH-метра проверяют по стандартным буферным растворам, имеющим pH 1,68; 4,00; 6,88 и срок хране­ ния не более 3 месяцев при температуре 2— 5°С .

Подготовку' прбора к работе и определение pH среды прово­ дят по инструкции, прилагаемой к прибору .

Стр. 6 ГОСТ 14746-4*

2.8. Осмотическое давление среды определяют по разности тем­ пературы между точкой таяния льда (нулевая точка на термо­ метре) и точкой истинной кристаллизации. Исследование прово­ дят при помощи термометра Бекмана .

Перед началом работы каждый раз проводят калибровку тер­ мометра— установление нулевой точки. При этом термометр Бек­ мана помещают в мелкораздробленный тающий лед или снег и наблюдают уровень р^тути и капилляре. Нели уровень ртути ока­ жется в нижней части шкалы или ниже делений шкалы термо­ метра, то добавляют ртуть из верхнего резервуара. Для этого термометр перевертывают и нагревают рукой нижний резервуар ртути до тех пор, пока ртуть капилляра не соединится с ртутным столбиком верхнего резервуара. После этого термометр медленно охлаждают до температуры 2 —3°С, погрузив его на 7— 10 мин в воду со льдом. Затем, держа термометр правой рукой за верхнюю его треть, коротким но сильным ударом верхней части термо­ метра но большому или указательному пальцу левой руки отры­ вают излишнюю ртуть от ртутного столба верхнего резервуара .

Добиваются разрыва столбика ртути в месте соединения ка­ пилляра с верхним резервуаром. После этого ставят термометр в мелкораздробленный лед и определяют уровень ртутного стол­ бика. Указанную манипуляцию повторяют до тех пор, пока верх­ ний мениск ртутного столбика в капилляре при температуре тая­ ния льда не будет стоять в верхней части шкалы между 3~5°С .

Определяют нулевую точку с точностью до 0,01°С и записы­ вают ее. Для исследования ГЦЖ среду каждый раз заливают в объеме 4— 5 мл в чистую пробирку такого размера, чтобы ртут­ ный резервуар термометра был полностью погружен в жидкость и не касался стенок и дна пробирки; для этого термометр фикси­ руют при помощи резинового кольца или корковой пробки .

Термометр с пробиркой помещают d другую пробирку такого размера, чтобы между стенками пробирок оставалось простран­ ство в 2—3 мм. Подготовленный таким образом термометр пере­ носят в охлаждающую ванну. Исследуемую среду постоянно по­ мешивают петлевидной мешалкой, наблюдая при этом за пшгижением уровня ртути в капилляре. После переохлаждения выде­ ляется теплота кристаллизации и столбик трути поднимается до истинной температуры замерзания ГЦЖ среды и некоторое время остается на постоянном уровне. Эту точку отмечают и записывают с точностью до Исследование повторяют. Для этого про­ бирку со средой отогревают в руке и определяют точку замерза­ ния .

Если после двух исследований расхождения не превышают O.OIX, то проводят расчет осмотического давления. При расхож, дении после повторного исследования более чем «а 0,оГС прозоГОСТ 1Ш 6-М Стр. 7 дяг дополнительные исследования до получения необходимых расчетных данных .

При исследовании растворов разной концентрации пробирку и термометр после каждого исследования тщательно ополаски­ вают дистиллированной водой и просушивают .

Для охлаждения ванн применяют одну из указанных смесей:

а) смесь естественного льда с поваренной солью ( 3 : 1 ) .

б) смесь спирта с сухим льдом;

в) спирт, охлажденный пропусканием через змеевик паров жидкого азота или воздуха .

Температуру о ваннах в период работы поддерживают на уровне минус 20—40°С .

Осмотическое давление вычисляют по депрессии — Д ГЦЖ среды, что представляет собой разность между нулевой точкой на термометре и истинной температурой замерзания среды .

Пример:

Допустим, что пулевая точка на термометре Бекмана соответ­ ствует 4,46П После трехкратного измерения истинная темпера­ С .

тура замерзания раствора составляет: 3.79; 3,80; 3,81°С .

Среднее значение — 3.80°С .

Определяем /\1 4.46 — 3,80 = 0,66 .

= По формуле Р0 * 12,04 -ДГ определяем осмотическое давление среды при (гС:

Я0 «= 12,04 - 0.66 = 7.91 .

Зная осмотическое давление раствора при 0°С, можно найти его давление при любой температуре (Рп) в атм, исходя из зако­ нов Гей-Люссака:

Ту + т .

т* где То— температура абсолютного нуля (минус 273Э ); С Тп — температура, при которой требуется определить осмо­ тическое давление жидкости, в °С;

Рп — определяемое осмотическое давление в атм .

П р и м е р о п р е д е л е н и я осмотического давления ГЦЖ среды при температуре 39*С (Рп ) в атм:

273 + 39 •7.94 8.05 .

2.9. Качество спермы по подвижности спермиеп определяют по десятибалльной оценке, под микроскопом при температуре 40—42°С и увеличении микроскопа не менее чем в 120 раз .

Исследование спермы на протяжении первых 5 —6 суток про­ водят через каждые 24— 48 ч, а при дальнейшем хранении спер­ м ы — черюз каждые 24 ч .

Стр. 8 ГОСТ 14746—М Для создания на предметном столике микроскопа стабильной температуры 40—42°С применяют термостаты для микроскопов (ТМ-1 и др.), снабженные стандартными контактными термомет­ рами или нестандартными однотемпературиыми термометрами .

Для опенки на чистое предметное стекло наносят небольшую каплю разбавленной спермы и 4—6 капель (2,8% ) изотонического раствора лимоннокислого натрия. Капли раствора цитрата нано­ сят вокруг капли спермы на расстоянии 2—3 мм. После накрывання покровным стеклом капля разбавленной спермы оказы­ вается в центре, а раствор по краям .

Раствор цитрата должен выходить за пределы края покров­ ного стекла. Такое приготовление раздавленной капли предупреж­ дает преждевременное подсыхание капли спермы, создает хоро­ шую видимость спермнев в поле зрения микроскопа и способству­ ет правильной оценке спермы .

Результаты оценки спермы учитывают по форме приложения х настоящему стандарту .

2.10 Для определения выживаемости спермнев в сперме, со­ храняемой при температуре 2—5°С, используют густую и среднюю сперму с активностью не ниже 8.0 баллов .

Опыты повторяют 3—5 раз и используют один смешанный эякулят спермы, полученный от одного, двух или трех быковпроизводителеи .

Разбавленную сперму сохраняют в бытовом холодильнике или пищевом термосе со льдом, температуру которых ежедневно про­ веряют максимальным термометром и записывают в журнал .

Оценку сохраняемой спермы по активности (количеству живых спермнев) проводят з соответствии с п. 2.9. По окончании иссле­ дования спермы определяют выживаемость спермнев в часах и общий показатель абсолютной выживаемости спермнев .

Выживаемость спермиев в часах определяют по оценке под­ вижности спермиев до 1,0 балла включительно плюс Vi времени, прошедшего до следующего исследования .

Например, через 10 суток от начала хранения активность спермы была установлена 1,0, а через 11 суток — единичная под­ вижность .

Следовательно, выживаемость спермиев — 252 ч .

Показатель абсолютной выживаемости (S) спермиев опреде­ ляют по формуле:

S ™ O •- Oiti + Й j.................. н т. д., it% * з/ где а,/,; и т. д. — показатели абсолютной выживаемости спер­ миев за отрезок времени;

с»; о2 и т. д. — количество живых спермиев в баллах;

ГОСТ 14746—69 Стр. 9

–  –  –

at = Oett - 1 -.18 = 18 .

Выживаемость спермиев в часах равна 252 .

Uо = 264 — 12 ч, г. е. '/з времени, прошедшего от предпоследне­ го до последнего исследования .

Полученные результаты по выживаемости спермиев з разных опытах обрабатывают биометрическим методом .

2.11. Для определения выживаемости спермиев, сохраняемых при температуре 38°С, пробы с разбавленной спермой ставят в термостат, который должен быть проверен за 3—5 дней до опыта на поддержание стабильной температуры .

Сперму, сохраняемую при 38X1,' оценивают через каждые ' 1—4 ч. Оценку спермы и учет результатов исследования проводят по пп. 2.9. и 2.10 .

2.12. Для определения оптимальной степени разбавления спер* мы заготавливают 7 стерильных флаконов, закрытых корковыми или резиновыми пробками, обернутыми пергаментной бумагой .

В первый флакон наливают 7 мл ГЦЖ среды, а в остальные 6 флаконов — по 4 мл .

Затем во флакон.V? 1 при температуре среды 28 -30°С добав­ ляют 1 мл свежеполученной спермы быка с оценкой не ниже С—8,0 .

Флакон с разбавленной спермой тщательно перемешивают .

При помощи стеклянной пипетки переносят 4 мл разбавленной спермы во флакон № 2 и получают разбавление в 16 раз .

Стр. 10 ГОСТ 1474* —69

–  –  –

Из флакона № 2 также переносят 4 мл разбавленной спермы флакон М» 3 я т. д. до флакона Л6 7 .

Из флакона N? 7, после тщательного перемешивания, 4 мл раз­ бавленной спермы выбрасывают .

В результате последовательного разбавления спермы получают разведения 1 : 8 ; I :il6; 1 :32; 1 : 64; 1 : 128; 1 :266; 1:612 .

ГЦЖ среду проверяют не менее трех раз .

Для этого готовят 3 ряда по 7 пробирок с вышеуказанными разведениями. В каждом ряду пробирок применяют сперму од­ ного эякулята. Таким образом, при трех повторностях получают 21 флакон разбавленной спермы от одного и того же объема спермы .

Флаконы с пробами разбавленной спермы ставят на хране­ ние при температуре 2—б^С. Оценку спермы и учет результатов исследования проводят по пп. 2.9 и 2.10 .

Оптимальную степень разбавления спермы определяют по наи­ большему показателю абсолютной выживаемости спермисв .

При этом учитывают, что а дозе должно содержаться не ме­ нее 40 млн. живых спермиев. При определении оптимальной сте­ пени разбавления спермы можно одновременно учитывать каче­ ство среды по п. 2.10 .

2.13. Для определения процента оплодотворяемости животных в одну охоту после осеменения их разбавленной сохраненной спермой используют здоровых проверенных ректально и вагинально коров в возрасте до 5 лет. имевших 2—3 нормальных отела. Для этих целей можно использовать и телок случного воз­ раста, отвечающих по своему развитию, весу и упитанности тре­ бованиям, предъявляемым к данной породе .

В опыте по установлению оплодотворяемости должно быть не менее 20 животных. Учет результатов осеменения проводят пред­ варительно через 3 месяца по определению беременности методом ректального исследования, а конечный — по отелам .

–  –  –

3.1. ГЦЖ среду хранят и транспортируют в склянках по ГОСТ 1770—64 при соблюдении стерильности и температуры 2— 5°С и течение 24 ч .

Замена ГОСТ 5.1314-72 введен гэаксн ГОСТ 8161—67 .

Стр. 12




Похожие работы:

«I Ф орма ГОСТ РВ 8.560-95 Приложение Д (обязательное) сог Измерительный информационный Внесен в Государственный реестр среде 1в измерений комплекс (ИИК) МО52 Аппаратура М052 Регистрационный № /ё„9 (наименование СИ и обозначение гина) Выпускается по техническим усло...»

«Министерство науки и высшего образования Российской Федерации Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "СИБИРСКИЙ ФЕДЕРАЛЬНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ" ПРОГРАММА вступительного испытания для поступающих в аспирантуру по напра...»

«Терлыч Андрей Евгеньевич МОДЕЛИ И АЛГОРИТМЫ УПРАВЛЕНИЯ ПРОЦЕССОМ ЭКСТРУЗИИ ПОЛИМЕРОВ ПРИ ПРОИЗВОДСТВЕ КАБЕЛЕЙ 05.13.06 Автоматизация и управление технологическими процессами и производствами (в пром...»

«ИСТОЧНИК ВТОРИЧНОГО ЭЛЕКТРОПИТАНИЯ РЕЗЕРВИРОВАННЫЙ SKAT-V.12DC-4 ICE РУКОВОДСТВО ПО ЭКСПЛУАТАЦИИ ФИАШ. 436237.019 РЭ Настоящее руководство по эксплуатации предназначено для ознакомления с основными техническими характеристиками и изучения принципа...»

«УДК 621.74.06 ИСЛЕДОВАНИЕ КАЧЕСТВА УПЛОТНЕНИЯ ЛИТЕЙНОЙ ФОРМЫ ПРИ ВЫСОКОСКОРОСТНОМ УДАРНОМ УПЛОТНЕНИИ Е. С. Ильиных, В. Г. Москалев Алтайский государственный технический университет им. И. И. Ползунова, г. Барнаул, Россия Проведены исследования качества уплотнения...»

«Министерство образования и науки Российской Федерации ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ "САРАТОВСКИЙ НАЦИОНАЛЬНЫЙ ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УН...»

«РГи ОД ^ АЗГ 2000 ' ГУСЕВ Юрий Андреевич УДК 669.716 РАЗРАБОТКА ЭЛЕМЕНТОВ ТЕХНОЛОГИИ ВОССТАНОВЛЕНИЯ ДЕ­ ТАЛЕЙ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННОЙ ТЕХНИКИ ГАЗОПЛАМЕННОМ НАПЛАВКОЙ НАПЫЛЕНИЕМ ПОРОШКОВЫХ СПЛАВОВ И РАС­ ЧЕТНЫХ МЕТОДОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОСНОВНЫХ ПАРАМЕТРОВ ПРОЦЕСС...»

«Серия "Политология. Религиоведение" И ЗВЕСТИЯ 2014. Т. 7. С. 88-94 Иркутского Онлайн-доступ к журналу: государственного http://isu.ru/izvestia университета УДК 327.56(479.224+479.225) Россия и Европейский союз на Южном Кавказе: миротворчество и мифотворчество О. С. Самутина, К. В. Юматов Кемеровский государственный уни...»

«Д. В. Александров, А. Ю. Зубарев, Л. Ю. Искакова ПРИКЛАДНАЯ ГИДРОДИНАМИКА УЧЕБНОЕ ПОСОБИЕ ДЛЯ ВУЗОВ Рекомендовано методическим советом УрФУ в качестве учебного пособия для студентов, обучающихся по программе бакалавр...»




 
2019 www.mash.dobrota.biz - «Бесплатная электронная библиотека - онлайн публикации»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.