WWW.MASH.DOBROTA.BIZ
БЕСПЛАТНАЯ  ИНТЕРНЕТ  БИБЛИОТЕКА - онлайн публикации
 

«© С. Я. Гусейнова, Р. Т. Гулиева, М. З. Дадашов, А. И. Джафаров, Ф. Р. Яхъяева, Т. М. Гусейнов DOI: 10.15293/2226-3365.1605.15 УДК 57 + 612 ОКИСЛИТЕЛЬНАЯ МОДИФИКАЦИЯ ГЕМОГЛОБИНА ...»

Вестник Новосибирского государственного педагогического университета

5(33)2016 www.vestnik.nspu.ru ISSN 2226-3365

© С. Я. Гусейнова, Р. Т. Гулиева, М. З. Дадашов, А. И. Джафаров, Ф. Р. Яхъяева, Т. М. Гусейнов

DOI: 10.15293/2226-3365.1605.15

УДК 57 + 612

ОКИСЛИТЕЛЬНАЯ МОДИФИКАЦИЯ ГЕМОГЛОБИНА ИЗОЛИРОВАННЫХ

ЭРИТРОЦИТОВ В ИНКУБАЦИОННОЙ СРЕДЕ,

СОДЕРЖАЩЕЙ НИТРИТ НАТРИЯ И СЕЛЕНИТ НАТРИЯ

С. Я. Гусейнова, Р. Т. Гулиева, М. З. Дадашов, А. И. Джафаров, Ф. Р. Яхъяева, Т. М. Гусейнов (Баку, Азербайджан) Рассмотрено влияние нитрита натрия и селенита натрия при их совместном и одиночном воздействии на процессы окисления гемоглобина (Hb), перекисного окисления липидов (ПОЛ), активность антиоксидантных (АО) энзимов – глутатионпероксидазы (ГП) и каталазы в эритроцитах человека in vitro. Выявлено, что нитриты оказывают значительное воздействие на окислительные процессы в эритроцитах и Hb, а селенит натрия ослабляет развитие нитрит-индуцированного окислительного процесса в эритроцитах и снижает образование метгемоглобина (MetHb) на 25–40 %. Оказывая значительное воздействие на окислительные процессы в эритроцитах, нитриты не приводят к заметному возрастанию показателей ПОЛ в них. Под воздействием нитрита происходит незначительное изменение активности АО фермента ГП (до 20–30 %), активность каталазы во всех случаях существенно падает (в 1,5–2 раза). Нитриты в инкубационной среде способствуют увеличению концентраций мембранного оксигемоглобина и MetHb, а селенит натрия оказывает тормозящее действие на этот процесс .



Ключевые слова: нитрит натрия, селенит натрия, эритроциты, метгемоглобин, глутатионпероксидаза, каталаза, перекисное окисление липидов, мембранный гемоглобин .

Гусейнова Севиндж Явус – научный сотрудник, Институт физики, Национальная Академия наук Азербайджана .

E-mail: seva.gy7 @mail.ru Гулиева Ругия Таирага – старший научный сотрудник, Институт физики, Национальная Академия наук Азербайджана .

E-mail: ruhiyya.guliyeva@yahoo.com Дадашев Мурсал Зубайил – доктор философии (PhD) по биологии, ведущий научный сотрудник, Институт физики, Национальная Академия наук Азербайджана .

E-mail: mursald@mail.ru Джафаров Ахверди Исмаил – доктор биологических наук, ведущий научный сотрудник, Институт физики, Национальная Академия наук Азербайджана .

E-mail: hagverdi.cafarov@yahoo.com Яхъяева Флорида Радик – доктор философии (PhD) по биологии, старший научный сотрудник, Институт физики, Национальная Академия наук Азербайджана .

E-mail: florida.r.yahyayeva@mail.ru Гусейнов Токай Магеррам – доктор биологических наук, заведующий лабораторией «Экологическая биофизика», Институт физики, Национ

–  –  –

Одним из приоритетных участников ан- Материалы и методы тропогенного загрязнения внешней среды яв- В модельных опытах основным объекляются азотсодержащие соединения в связи с том исследования являлись эритроциты челонарастающим ростом промышленных и осо- века и гемоглобин. В экспериментах была исбенно химических производств, химизацией пользована кровь доноров, взятая из локтевой сельского хозяйства и др., что неизбежно при- вены в пробирки с гепарином. При центрифуводит к значительному росту нитратно-нит- гировании 150 G в течение 15 мин проводили ритной нагрузки на живые организмы. отделение плазмы крови от эритроцитов .



Для Нитриты способны оказывать свое дей- получения суспензии эритроцитов осадок ствие на всех структурно-функциональных эритроцитов трижды отмывали в десятикратуровнях, от целого организма до отдельных ном объеме физиологического раствора (0,9 % молекул. В основе системных механизмов NaCl), центрифугировали при 150 G в течение этого влияния лежит реакция превращения 15 мин с последующим удалением надосадочнитрит-ионов в монооксид азота (NO), кото- ной жидкости. Гемолиз эритроцитов достирый способен как стимулировать, так и подав- гался путем разбавления эритроцитарной лять процессы окисления биомолекул [1–2]. массы дистиллированной водой в соотношеОдними из основных видов вредных действий нии 1:9 с последующим замораживанием, отNO являются его участие в окислении гемо- таиванием и центрифугированием при 10 000 глобина, образовании NO-комплексов с гемо- G .

глобином и энзимами антиоксидантной си- В качестве источника оксида азота исстемы [3]. В результате запускается цепь био- пользовали нитрит натрия (NaNO2, конечная химических реакций, которая приводит к ис- концентрация которого в инкубационной тощению АО системы в клетке и в организме среде составляла 0,5–1,0 мМ). Селенит натрия в целом. использовали с конечной концентрацией в инСреди важных компонентов системы, кубационной среде в широком интервале от 1 участвующей в регуляции уровня окислитель- мМ до 1 мкМ .

ных процессов в живых организмах находится Нами были проведены две серии опытов эссенциальный микроэлемент селен, входя- с различными сроками инкубирования образщий в состав около 30 протеинов, часть из ко- цов (30 и 60 мин) при температуре 37 °С. Кажторых обладает АО свойствами [4]. В этой дая серия включала в себя один контрольный связи механизм развития окислительного и четыре опытных образца. Контрольный обстресса, индуцированного нитритами в био- разец содержал 2,2 мл суспензии эритроцитов, объектах в присутствии соединений селена, а в четырех опытных образцах – по 2,0 мл суспредставляет определенный интерес. пензии эритроцитов и NaNO2, Na2SeO3, В данной работе рассматривалось воз- Na2SeO3 + NaNO2 и NaNO2 + Na2SeO3, соответможное АО действие селенита натрия в инку- ственно .

бационной среде, содержащей нитрит натрия, В первой серии опытов все образцы инпродуцирующий окись азота и индуцирую- кубировали 30 мин, в образцах с совместным щий окислительный процесс в гемоглобине и воздействием селенита и нитрита интервал эритроцитах. между их последовательным внесением в инкубационную среду составлял 15 мин. Во вто

–  –  –

Рис. 1. Дозозависимое нитрит-индуцированное накопление MetHb в инкубационной среде с суспензией эритроцитов в присутствие 0,5 мМ – 1,0 мМ NaNO2 Fig. 1. Dose-dependent accumulation of nitrite induced MetHb in the incubation medium with the suspension of erythrocytes in the presence of 0.5 mM - 1.0 mM of NaNO2

–  –  –

Следующим необходимым шагом иссле- внесения селенита или нитрита в среду .



В слудования было выявление окислительного дей- чае предварительного (до нитрита) внесения ствия самого селенита натрия, взятого в широ- Na2SeO3 окислительный эффект нитрита на Hb ком концентрационном диапазоне от 1,0 мМ менее выражен. Накопление MetHb достигало до 1 мкМ. Эти опыты показали, что сам селе- своего максимального стабильного уровня нит натрия в концентрационных пределах уже в первые 30 мин. Учитывая это можно пониже 0,1 мМ не оказывает существенного вли- лагать, что для варианта инкубирования эритяния на накопление MetHb, а концентрация 1,0 роцитов с NaNO2 + Na2SeO3 более длительное мМ значимо (до 30 %) повышает уровень нитритное воздействие с общим сроком 60 мин не играет существенной роли в усилении MetHb .

В табл. 1 представлены данные по уров- окислительного эффекта относительно вариням накопления MetHb в эритроцитах под воз- анта Na2SeO3 + NaNO2, при котором срок воздействием как одиночного, так и совместного действия нитрита вдвое меньше (ввиду его присутствия Na2SeO3 и NaNO2 при различных внесения после 30 мин инкубации пробы с сесроках инкубирования. Из полученных дан- ленитом). Последнее говорит о том, что основных следует, что селенит натрия во всех слу- ной окислительный эффект достигается уже в чаях несколько снижает окислительное дей- первые 30 мин инкубирования .

ствие нитрита (25–40 %), и это влияние в малой степени зависит от последовательности

–  –  –

Относительно малая степень интенсифи- всех экспериментах внесенный в инкубационкации ПОЛ эритроцитов (50–70 %) под воз- ную среду селенит натрия в первые 30 мин акдействием нитрита, наряду с его существен- тивно включается в гемоглобиновую фракцию ным окислительным воздействием на Hb (уве- и, усиливая АО свойства гемоглобина, в той личение содержания MetHb в десятки раз), или иной мере ослабляет развитие индуцироуказывает на то, что образовавшийся в боль- ванного окислительного процесса, что отраших количествах MetHb, а возможно, и другие жается как на накоплении MetHb, так и пропродукты взаимодействия нитритов (окиси дуктов ПОЛ. В нашем случае это позволяет азота) с гемоглобином, могут тормозить раз- считать, что включенный из инкубационной витие реакций ПОЛ, т. е. выступать в роли АО среды в молекулу гемоглобина селен локалиУвеличение концентрации нитрита в ин- зуется, замещая серу, в проксимальном кубационной среде приводит к увеличению участке -цепи в положении цистеина-93 в мембранного оксигемоглобина и MetHb. Все непосредственной близости к гему, а также, это способствует модификации протеиновых возможно, и в других SH-группах гемоглокомпонентов мембранного аппарата [11]. бина, подвергаемых атаке оксидом азота. ОтКасаясь АО действия селена, следует от- сюда следует, что включенный в Hb селен и метить, что по некоторым данным сам гемо- NO, оказываясь в непосредственной близости глобин, являясь селенопротеином, нестехио- друг от друга, взаимно влияют на производиметрично поглощает селен, в том числе заме- мые ими эффекты, в том числе и окислительщая серу, предположительно локализованную ного характера .

в цистеин-93 Hb [19] и оказывает определенный АО эффект [20; 21]. Характерно, что во

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Реутов В. П., Сорокина Е. Г., Каюшин Л. П. Участвуют ли нитритные ионы в регуляции 1 .

систем внутри- и межклеточной сигнализации? // Вопр. мед. химии. – 1994. – Т. 40, № 6. – С. 31–35 .

2. Hanafy K. A., Martin E., Murad F. CCTeta, a novel soluble guanylyl cyclase-interacting protein // J. Biol. Chem. – 2004. – Vol. 279, № 45. – Р. 46946–46953 .

Yoshida К., Kasama К. Biotransformation of nitric oxide. // Environ. Health Perspect. – 1987. – 3 .

Vol. 73. – P. 201–205 .

4. Gladyshev V. N. Selenoproteins and selenoproteomes // Selenium: Its molecular biology and role in human health / Ed. D. L. Hatfield, M. J. Berry, V. N. Gladyshev. – Springer, 2006. – P. 101– 112 .

5. Szebeni J., Winterbourn C. C., Carrell R. W. Oxidative interactions between haemoglobin and membrane lipid. A liposome model // Biochem. J. – 1984. – Vol. 220, № 3. – P. 685–692 .

Моин В. М. Простой и специфический метод определения активности глутатионпероксидазы в эритроцитах // Лаб. Дело. – 1986. – № 12. – C. 724–727 .

Королюк М. А. Метод определения активности каталазы // Лаб. дело. – 1988. – Т. 64, № 3. – 7 .

С. 16–17 .

8. Mengel C. F., Kann H. E. Effect of in vivo hyperoxid of erythrocytes, III in vivo peroxidation of erythrocytes lipid. // J. Nutr. Chemical Invest. – 1966. – Vol. 45. – P. 1150–1159 .

Худсон Д. Ж. Статистика для физиков. – М.: Мир, 1990. – 242 с .

9 .

–  –  –

10. Widmer C. C. et al. Hemoglobin can attenuate hydrogen peroxide induced oxidative stress by acting as an antioxidative peroxidise // Antioxidants and Redox signalling. – 2010. – Vol. 12, № 2. – P. 185–199 .

11. Low P. S. Role of hemoglobin denatyration and band 3 clustering in initiating red cell removal // Red Blood Cell Aging / Eds M. Magnani, A. De Flora). – New York: Plenum Press, 1991. – P. 173–183 .

12. Реутов В. П., Сорокина Е. Г., Охотин В. Е., Косицин Н. С. Циклические превращения NO в организме млекопитающих. – М.: Наука, 1998. – 159 c .

13. Ванин А. Ф., Кубрина Л. Н., Лисовская И. Л., Маленкова И. В., Четвериков А. Г. Эндогенные нитрозильные комплексы гемового и негемового железа в клетках и тканях. // Биофизика. – 1971. – Т. 16. – С. 650–658 .

14. Ванин А. Ф. Динитрозильные комплексы железа эндогенные сигнальные агенты в клетках и тканях животных и человека (Гипотеза) // Биофизика. – 2004. – Т. 49, Вып. 4. – С. 581–568 .

15. Стародубцева М. Н., Черенкевич С. Н. Механизмы реакций гемоглобина с пероксинитритом в водно-солевом растворе // Изв. НАН Беларуси. Серия медико-биол. наук. – 2003. – № 2. – C. 86–90 .

16. Hobbs A. I., Gladwin M. T., Patel R. P., Williams D. L. H., Butler A. R. Haemoglobin: NO transporter, NO inactivator or none of the above // TRENDS in Pharmacological Science. – 2002. – Vol. 23. – P. 406–411 .

17. Bonavertura C. Effects of S-Nitrosation on Oxygen Binding by Normal and Sickle Cell Hemoglobin // Journal of Biological Chemistry. – 1999. – Vol. 274, № 35. – P. 24742–24748 .

18. Чеснокова Н. П., Понукалина Е. В., Бизенкова М. Н. Молекулярно-клеточные механизмы инактивации свободных радикалов в биологических системах // Успехи современного естествознания. – 2006. – № 7. – С. 29–36 .

19. Millar K. P., Sheppard A. D., Gardiner M. A. A comparison of the distribution of Se in proteins of blood, liver, and kidney from rats differing in selenium status // N.Z.J. Agr. Res. – 1972. – Vol. 15, № 4. – P. 756–777 .

20. Гусейнов Т. М., Яхъяева Ф. Р., Гулиева Р. Т. Влияние селена на устойчивость гемоглобина к фотоокислительным процессам // Украинский биохимический журнал. – 2012. – Т. 84, № 2. – C. 53–60 .

21. Гусейнов Т. М., Яхъяева Ф. Р. Селен как антиокислительный протектор в эритроцитах. – Saarbruken, Germany: Lambert Academic, 2014. – 134 p .

–  –  –

Sevinc Yavus Huseynova, Research Associate, Institute of Physics, Azerbaijan National Academy of Sciences, Baku, Azerbaijan .

ORCID ID:http://orcid.org/0000-0001-5480-2680 E-mail: seva.gy7 @mail.ru Rugiya Tairaga Guliyeva, Senior Research Associate, Institute of Physics, Azerbaijan National Academy of Sciences, Baku, Azerbaijan .

ORCID ID: http://orcid.org/0000-0002-3263-9306 E-mail: ruhiyya.guliyeva@yahoo.com Mursal Zubail Dadashov, PhD in Biology, Leading Researcher, Institute of Physics, Azerbaijan National Academy of Sciences, Baku, Azerbaijan .

ORCID ID: http://orcid.org/0000-0001-5480-2680 E-mail: mursald@mail.ru Ahverdi smail Jafarov, Doctor of Biological Sciences, Leading Researcher, Institute of Physics, Azerbaijan National Academy of Sciences, Baku, Azerbaijan .

ORCID ID: http://orcid.org/0000-0002-5950-8891 E-mail: hagverdi.cafarov@yahoo.com Florida Radik Yahyaeva, PhD in Biology, Senior Research Associate, Institute of Physics, Azerbaijan National Academy of Sciences, Baku, Azerbaijan .

ORCID ID: http://orcid.org/0000-0003-0772-1241 E-mail: florida.r.yahyayeva@mail.ru Tokay Maharram Huseynov, Doctor of Biological Sciences, Head of Laboratory of Ecological Biophysics, Institute of Physics, Azerbaijan National Academy of Sciences, Baku, Azerbaijan .

ORCID ID: http://orcid.org/0000-0002-8363-0141 E-mail: thuseynov@physics.ab.az

OXIDATIVE MODIFICATION OF HEMOGLOBIN OF ISOLATED

RED BLOOD CELLS IN THE INCUBATION MEDIUM CONTAINING

SODIUM NITRITE AND SODIUM SELENITE

Abstract

The article considers the influence of sodium nitrite and sodium selenite, with their joint and single effect on the processes of haemoglobin oxidation (Hb), lipid peroxidation (LPO), antioxidant (AO) enzymes – glutathione peroxidase (GP) and catalase in human erythrocytes in vitro. It was found that nitrites have a significant effect on the oxidative processes in red blood cells and Hb, and sodium selenite reduces the development of the nitritinducted oxidative processes in red blood cells and formation of methemoglobin (MetHb) by 25–40 %. Sodium nitrite, which significant influences on the oxidative processes of Hb, does not lead to a appreciable increase the POL in erythrocytes. Under the influence of nitrite a is undergoing minor changes of activity AO enzyme GP (20–30 %), while the catalase activity in all cases falls significantly (1.5–2 times). Nitrites in the incubation medium also lead

–  –  –

to an increase in the concentrations of membrane binding oxyhemoglobin and MetHb and sodium selenite inhibits this process in the incubation medium .

Keywords Sodium nitrite, sodium selenite, erythrocytes, met hemoglobin, glutathione peroxidase, catalase, lipid peroxidation, membrane binding hemoglobin

REFERENCES

1. Reutov V. P., Sorokina E. G., Kaiushin L. P. Do nitrite ions participate in regulating systems of intra- and intercellular signalling? Problems of Medical Chemistry. 1994, vol. 40, no. 6, pp. 31–35 .

(In Russian)

2. Hanafy K. A., Martin E., Murad F. CCTeta, a novel soluble guanylyl cyclase-interacting protein .

J. Biol. Chem. 2004, vol. 279, no. 45, pр. 46946–46953 .

Yoshida К., Kasama К. Biotransformation of nitric oxide. Environ. Health Perspect. 1987, vol. 73, 3 .

pp. 201–205 .

4. Gladyshev V. N. Selenoproteins and selenoproteomes. Selenium: Its molecular biology and role in human health. Ed. D. L. Hatfield, M. J. Berry, V. N. Gladyshev. Springer Publ., 2006, pp. 101– 112 .

5. Szebeni J., Winterbourn C. C., Carrell R. W. Oxidative interactions between haemoglobin and membrane lipid. A liposome model. Biochem. J. 1984, vol. 220, no. 3, pp. 685–692 .

Moin V. М. Simple and specific method for determining the activity of glutathione peroxidase in 6 .

erythrocytes. Lab. Delo. 1986, no. 12, pp. 724–727. (In Russian)

7. Korolyuk M. A. A method of measurement of catalase activity. Lab. Delo. 1988, vol. 64, no. 3, pp. 16–17. (In Russian)

8. Mengel C. F., Kann H. E. Effect of in vivo hyperoxid of erythrocytes, III in vivo peroxidation of erythrocytes lipid. J. Nutr. Chemical Invest. 1966, vol. 45, pp. 1150–1159 .

9. Hudson D. J. Statistics for Physicists. Moscow, Mir Publ., 1990, 242 p. (In Russian)

10. Widmer C. C. et al. Hemoglobin can attenuate hydrogen peroxide induced oxidative stress by acting as an antioxidative peroxidise. Antioxidants and Redox signalling. 2010, vol. 12, no. 2, pp. 185– 199 .

11. Low P. S. Role of hemoglobin denatyration and band 3 clustering in initiating red cell removal .

Red Blood Cell Aging. Eds M. Magnani, A. De Flora. New York, Plenum Press Publ., 1991, pp. 173– 183 .

12. Reutov V. P., Sorokina E. G., Ohotin V. E., Kosicin N. S. Cyclic Conversion of Nitric Oxide in the Mammalian Body. Moscow, Nauka Publ., 1998, 159 p. (In Russian)

13. Vanin A. F., Kubrina L. N., Lisovskaya I. L., Malenkova I. V., Chetverikov A. G. Endogenous nitrosyl complexes of heme and non-heme iron in cells and tissues. Biophysics. 1971, vol. 16, pp. 650–658. (In Russian)

14. Vanin A. F. Dinitrosyl iron complexes endogenous signaling agents in cells and tissues of animals and humans (hypothesis). Biophysics. 2004, vol. 49, issue 4, pp. 581–568. (In Russian)

15. Starodubtseva M. N., Cherenkevich S. N. The mechanisms of reactions between hemoglobin and peroxynitrite in the solution. NAS of Belarus A series of medical and biological sciences. 2003, no. 2, pp. 86–90. (In Russian)

16. Hobbs A. I., Gladwin M. T., Patel R. P., Williams D. L. H., Butler A. R. Haemoglobin: NO transporter, NO inactivator or none of the above. TRENDS in Pharmacological Science. 2002, vol. 23, pp. 406–411 .

–  –  –

17. Bonavertura C. Effects of S-Nitrosation on Oxygen Binding by Normal and Sickle Cell Hemoglobin. Journal of Biological Chemistry. 1999, vol. 274, no. 35, pp. 24742–24748 .

18. Chesnokova N. P., Ponukalin E. V., Bizenkov M. N. Molecular and cellular mechanisms of inactivation of free radicals in biological systems. Medical sciences. 2006, no. 7, pр. 29–36. (In Russian)

19. Millar K. P., Sheppard A. D., Gardiner M. A. A comparison of the distribution of Se in proteins of blood, liver, and kidney from rats differing in selenium status. N.Z.J. Agr. Res. 1972, vol. 15, no. 4, pp. 756–777 .

20. Huseynov T. M., Yakhyayeva F. R., Guliyeva R. T. The effect of selenium on the stability of hemoglobin to photooxidative processes. Ukrainian Biochemical Journal. 2012, vol. 84, no. 2, pp. 53–60. (In Russian)

21. Huseynov T. M., Yakhyayeva F. R. Selenium as an antioxidant protector in the erythrocytes. Saarbruken, Germany, Lambert Academic Publ., 2014, p. 134. (In Russian)

–  –  –






Похожие работы:

«Методическая работа: "Гимнастика ума" как средство развития познавательной активности детей 5-7 лет. Рыбакова Наталья Владимировна, воспитатель МДОУ детского сада № 243 Ярославль, 2016 г. Содержание Введение 3 Основная часть 4 Глава 1. Т...»

«адамгершілікті асыл асиеттерін здіксіз ялата білсек, ертегі азамат жеке тланы зіндік кзарасыны алыптасуына, айналасымен санасуына ыпал етері сзсіз. ай заманда болмасын адамзат алдында тратын лы мрат-міндеттеріні е бастысы зіні ісін, мірін жаластыратын салауатты, саналы рпа трбиелеу. Олексюк...»

«ЧТЕНИЯ ПАМЯТИ АЛЕКСЕЯ ИВАНОВИЧА КУРЕНЦОВА A.I. Kurentsov's Annual Memorial Meetings _ 2013 вып. XXIV УДК 595.782(571.6) СОВКООБРАЗНЫЕ ЧЕШУЕКРЫЛЫЕ (LEPIDOPTERA, NOCTUOIDEA) ДУБОВО-ЛЕСПЕДЕЦИЕВЫХ РЕДКОЛЕСИЙ ЮГА АМУРСКОЙ ОБЛАСТИ: ВЕСЕННЕ-РАННЕЛЕТНИЙ ФЕНОЛОГИЧЕСКИЙ ПЕРИОД А.А. Барбарич Благовещенский государственный педагогический университет, г....»

«келе, кредиттік оыту жйесіні кздеген масаты лтты білім беру бадарламаларыны халыаралы дегейде мойындалуын амтамасыз ету, білім алушылар мен оытушыларды ынтасын арттырып, кш-жігерін білім сапасын ктеруге жмылдыру. Мнда басты назар...»

«Приказ Министерства здравоохранения РФ от 21 марта 2014 г. N 125н Национальный календарь профилактических прививок РФ и календарь профилактических прививок по эпидемическим показаниям Зарегистрировано в Минюсте России 25 апреля 2014 г. N 32115 В соотве...»

«^ НАСЫБУЛИНА АННА ВИКТОРОВНА СОВРЕМЕННЫЕ ТРАНСФОРМАЦИИ РУССКОЙ ЗАГАДКИ 10.02.01 русский язык Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата филологических наук.П. 2 Великий Новгород 2008 Работа выполнена на кафедре русского языка ГОУ ВПО "Псковский государственный педагогический униве...»

«Муниципальное бюджетное общеобразовательное учреждение Средняя общеобразовательная школа №2 ерждаю" У СОШ №2 И. о. Н.Н. П ЛАН работы школьной библиотеки на 2014 2015 учебный год п. Ноглики Анализ работы школьной библиотеки МБОУ СОШ№2 за 2013-2014 учебный год В 2013-2014 уче...»

«Каждая секция состоит из четырёх возрастных категорий: 1 младшая детская возрастная категория – до 12 лет включительно, 2 – старшая детская возрастная категория – до 15 лет включительно, 3 – юношеская возрастная категория – до 20 лет включительно. 4 – молодёжная возрастная категория – до 35 лет включительно. Возрастная категори...»




 
2019 www.mash.dobrota.biz - «Бесплатная электронная библиотека - онлайн публикации»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.