«AGRIMONIA EUPATORIA ПО ФЛАВОНОИДАМ Ж.С. Лесовая Надземная часть репешка обыкновенного используется в народной медицине при лечении многих заболеваний, в частности, Д.И. ...»
УДК 615.074, 615.072
РАЗРАБОТКА МЕТОДИКИ СТАНДАРТИЗАЦИИ ТРАВЫ РЕПЕШКА ОБЫКНОВЕННОГО
AGRIMONIA EUPATORIA ПО ФЛАВОНОИДАМ
Ж.С. Лесовая Надземная часть репешка обыкновенного используется в
народной медицине при лечении многих заболеваний, в частности,
Д.И. Писарев
заболеваний печени и желчного пузыря, что обусловлено наличием
О.О. Новиков богатого комплекса биологически активных веществ, среди которых преобладают фенольные соединения, а именно флавоноиды. На основании этого в статье изложена методика оценки качества травы Белгородский государственный репешка обыкновенного Agrimonia eupatoria по флавоноидам .
университет Ключевые слова: трава репешка обыкновенного, флавоноиды,
e-mail:
кверцетин, лютеолин-7-гликозид (цинарозид) zhannalesovaya@yandex.ru Трава репешка обыкновенного не является официнальным растительным сырьем, хотя широко применяется в нетрадиционной медицине [2]. Поэтому актуальным является изучение ее химического состава и разработка методик стандартизации данного вида сырья .
Оценку качества травы репешка обыкновенного предложено проводить по содержанию флавоноидов. Разработана методика количественного определения суммы флавоноидов методом УФ-спектрофотометрии в пересчете на кверцетин и лютеолин-7гликозид (цинарозид) .
Изучены условия извлечения флавоноидов из сырья этанолом 70% концентрации .
Соотношение сырья и общего объема экстрагента 1 : 100, время трехкратного извлечения на кипящей водяной бане 90 минут .
Для расчета суммы флавоноидов в пересчете на кверцетин оптическую плотность измеряли по собственному поглощению спиртового извлечения травы репешка обыкновенного после гидролиза при длине волны 370 нм. Расчет суммы флавоноидов проводили с использованием оптической плотности раствора стандартного образца кверцетина. Относительная ошибка предложенной методики 4,8%. Содержание флавоноидов в надземной части репешка обыкновенного составило 0,602% .
Для расчета суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-гликозид измеряли оптическую плотность окрашенного комплекса, образующегося при взаимодействии с 5% спиртовым раствором алюминия хлорида, при длине волны 400 нм. Расчет суммы флавоноидов проводили с использованием теоретического значения удельного показателя поглощения государственного стандартного образца лютеолина-7-гликозида (цинарозида). Относительная ошибка предложенной методики 2,6%. Содержание флавоноидов в траве репешка обыкновенного составляет 2,84% .
Целью настоящего исследования является разработка методики количественного определения суммы флавоноидов в траве репешка обыкновенного с использованием УФспектрофотометрии .
Экспериментальная часть. В результате проведенных исследований нами было установлено, что максимум оптической плотности УФ-спектра собственного поглощения спиртового извлечения из травы репешка после гидролиза совпадает с максимумом оптической плотности УФ-спектра раствора государственного стандартного образца (ГСО) кверцетина при длине волны 370 нм (рис. 1) .
В ходе эксперимента было установлено, что наиболее оптимальным экстрагентом, извлекающим наибольшее количество флавоноидов из травы репешка обыкновенного, является 70% этанол .
Рис. 1. УФ-спектры раствора ГСО кверцетина (1) и спиртового извлечения травы репешка обыкновенного после гидролиза (2) Методика получения спиртового извлечения из травы репешка обыкновенного (метод экстракции с использованием этанола 70% концентрации) . Точную навеску травы репешка, измельченного до размера частиц 1-3 мм, около 1,0 г поместили в колбу со шлифом вместимостью 150 мл, прибавили 30 мл 70% этанола, колбу присоединили к обратному холодильнику и нагревали на водяной бане в течение 30 минут. Затем колбу охладили под струей воды до комнатной температуры и содержимое колбы профильтровали через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 100 мл. Экстракцию повторили еще дважды указанным выше способом. Извлечения профильтровали через тот же фильтр в ту же мерную колбу. Объем фильтрата довели до метки 96% спиртом. Полноту извлечения флавоноидов из сырья подтвердили отрицательной цианидиновой пробой .
Методика количественного определения суммы флавоноидов в траве репешка обыкновенного в пересчете на кверцитин. 10 мл полученного спиртового извлечения из сырья репешка обыкновенного упарили на водяной бане, остаток высушили в сушильном шкафу при 110°С в течение 15 минут, затем растворили в 10 мл 10% серной кислоты. Гидролиз вели в колбе, подсоединенной к обратному холодильнику, при нагревании на кипящей водяной бане в течение 2 часов. В данных условиях происходит гидролиз только 3-О-гликозидов, 7-О-гликозиды, как более устойчивые, гидролизу подвергаются в более жестких условиях. Затем колбу охладили до комнатной температуры и содержимое ее профильтровали через бумажный фильтр .
Осадок, оставшийся на фильтре, промыли водой очищенной и растворили в 100 мл горячего 96% этанола .
На спектрофотометре СФ56 измерили оптическую плотность полученного раствора в диапазоне длин волн 300–450 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм .
Содержание суммы флавоноидов в пересчете на кверцетин вели по формуле 1:
Х=Ах х Сст х W х 100% / Аст х Сх х Vа (1), где Ах – оптическая плотность исследуемого раствора;
Сст – концентрация раствора стандартного образца кверцетина;
W – разведение, мл;
Аст – оптическая плотность раствора стандартного образца кверцетина;
Сх – концентрация исследуемого раствора;
Va – объем аликвоты, мл .
Результаты статистической обработки данных параллельных измерений показали, что содержание флавоноидов в траве репешка обыкновенного в пересчете на кверцитин составляет 0,602%, ошибка единичного определения при доверительной вероятности 98% составляет 4,8% (табл. 1) .
Таблица 1 Результаты количественного определения суммы флавоноидов в траве репешка обыкновенного в пересчете на кверцетин
Методика количественного определения суммы флавоноидов в траве репешка обыкновенного в пересчете на лютеолин-7-гликозид (цинарозид) .
При взаимодействии спиртового извлечения из травы репешка обыкновенного со спиртовым раствором алюминия хлорида наблюдается образование окрашенного комплекса, который вызывает батохромный сдвиг длинноволновой полосы поглощения и при этом дает основной максимум поглощения при длине волны 400 нм (рис. 2) .
Рис. 2. УФ-спектр комплекса спиртового извлечения из травы репешка обыкновенного с 5% спиртовым раствором алюминия хлорида Аналогичный максимум поглощения отмечен для комплекса ГСО лютеолин-7гликозида (цинарозида) .
Таким образом, для определения количества флавоноидов в пересчете на цинарозид 5 мл спиртового извлечения травы репешка поместили в колбу на 25 мл, прибавили 5 мл 5% спиртового раствора алюминия хлорида и 2–3 капли разведенной соляной кислоты. Объем смеси довели до метки 96% спиртом этиловым. Время прохождения комплексообразующей реакции в защищенном от света месте 45 минут .
Для приготовления раствора сравнения в колбу вместимостью 25 мл поместили 5 мл спиртового извлечения травы репешка, 2–3 капли разведенной соляной кислоты и довели объем до метки 96% этанолом .
С целью пересчета содержания суммы флавоноидов на цинарозид изучены комплексы раствора ГСО цинарозида с алюминия хлоридом, удельный показатель которых при аналитической длине волны (400 нм) составляет 145,0±2,3. На этом основании в формулу расчета включено теоретическое значение Е1%1см = 145 [1] .
Расчет вели по формуле 2:
X=Ax x W x W2 / E1%1см x m x Va, (2) где Ах – оптическая плотность исследуемого раствора;
W,W2 – разведения, мл;
Е1%1см – удельный показатель поглощения стандартного раствора цинарозида;
m – масса навески исследуемого сырья, г;
Va – объем аликвоты, мл .
Статистическая обработка данных параллельных измерений показала, что сумма флавоноидов в траве репешка обыкновенного в пересчете на лютеолин-7-гликозид составила в среднем 2,84%. Ошибка единичного измерения равна 2,6% (табл. 2) .
Таблица 2
Выводы. 1. Проанализированы методы экстракции травы репешка обыкновенного. В качестве наиболее оптимального метода для данного вида сырья выбран метод экстракции с использованием этанола 70% концентрации .
2. Предложена методика дифференциального количественного определения 7-Огликозидов в пересчете на лютеолин-7-гликозид (относительная ошибка определения при доверительной вероятности 98% составляет 2,6%) и 3-О-гликозидов в пересчете на кверцетин (относительная ошибка определения при доверительной вероятности 98% составляет 4,8%) после кислотного гидролиза, что позволяет наиболее полно определить содержание флавоноидов в сырье. Общая сумма флавоноидов по результатам данной методики составила 3,442%±0,1% .
Работа выполнена в рамках реализации ФЦП «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009–2013 гг., государственный контракт №П425 от 12.05.2010 г .
1. Андреева, В.Ю. Разработка методики количественного определения флавоноидов в манжетке обыкновенной Alchemilla Vulgaris L.S.L. / В.Ю. Андреева, Г.И. Калинкина // Химия растительного сырья. – 2000. – №1. – С. 85-88 .
2. Дикорастущие полезные растения России / Отв.ред. А.Л. Буданцев, Е.Е. Лесиовская. – СПб.: Изд-во СПХФА, 2001. – 663 с .
[ 
«